時間:2020-01-11| 作者:Admin
分子間互作的5大實驗方法:①蛋白質-蛋白質 ②蛋白質-RNA ③蛋白質-DNA ④蛋白質-DNA/RNA ⑤RNA-DNA
一、蛋白質-蛋白質
1.免疫沉淀(IP)
2.免疫共沉淀(co-IP)
3.GST pull-down
4.co-IP 和GST pull-down區(qū)別
①co-IP:研究的是體內自然狀態(tài)下的蛋白質互相作用,反應的是比較真實的蛋白質相互作用,由于沉淀下來的是蛋白質復合物,不能顯示蛋白質之間的相互作用是直接還是間接的。
②GST pull down:可以確定目的蛋白和檢測蛋白是否發(fā)生直接相互作用,但是無法得知體內真實的結合情況;
二、蛋白質-RNA
1.蛋白質與RNA相互作用
①RNA結合蛋白
RNA結合蛋白
微小RNA結合蛋白(如,Ago2)
②RNA
mRNA、lncRNA、circRNA、micRNA
③RIP:以蛋白為主角,研究RNA與蛋白的互作
④RNA pulldown:以RNA為主角,研究其與蛋白的互作
2、RNA結合蛋白免疫沉淀技術(RIP)
3.RNA pull down
三、蛋白質-DNA
染色質免疫共沉淀技術(ChIP)
體內研究DNA與蛋白質作用反應細胞內轉錄因子與啟動子Promoter的結合情況。
四、蛋白質-DNA/RNA
凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA)
五、熒光素酶實驗
1.啟動子活性研究
2.基因3’UTR區(qū)和microRNA結合實驗