酵母單雜交文庫(kù)篩選

相關(guān)應(yīng)用 ：

酵母單雜交技術(shù)最早是1993年由Li等從酵母雙雜交技術(shù)發(fā)展而來(lái)，通過(guò)對(duì)報(bào)告基因的表型檢測(cè)，分析DNA與蛋白之間的相互作用，以研究真核細(xì)胞內(nèi)的基因表達(dá)調(diào)控。由于酵母單雜交方法檢測(cè)特定轉(zhuǎn)錄因子與順式作用元件專(zhuān)一性相互作用的敏感性和可靠性，現(xiàn)已被廣泛用于克隆細(xì)胞中含量微弱的、用生化手段難以純化的特定轉(zhuǎn)錄因子。

酵母單雜交(Yeast one-hybrid)是根據(jù)DNA結(jié)合蛋白(即轉(zhuǎn)錄因子)與DNA順式作用元件結(jié)合調(diào)控報(bào)道基因表達(dá)的原理，克隆與靶元件特異結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子基因(cDNA)的有效方法。其理論基礎(chǔ)是：許多真核生物的轉(zhuǎn)錄激活子由物理和功能上獨(dú)立的DNA結(jié)合區(qū)(DNA-binding domain BD)和轉(zhuǎn)錄激活區(qū)(Activation domain AD)組成，因此可構(gòu)建各種基因與AD的融合表達(dá)載體，在酵母中表達(dá)為融合蛋白時(shí)，根據(jù)報(bào)道基因的表達(dá)情況，便能篩選出與靶元件有特異結(jié)合區(qū)域的蛋白。理論上，在單雜交檢測(cè)中，任何靶元件都可被用于篩選一種與之有特異結(jié)合區(qū)域的蛋白。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1. CDNA文庫(kù)質(zhì)量檢測(cè)

2 .誘餌載體的構(gòu)建 

3 .誘餌質(zhì)粒的自激活檢測(cè)

4 .誘餌基因抑制濃度的調(diào)試

5 .文庫(kù)篩選

6 .文庫(kù)篩選結(jié)果測(cè)序分析

7.詳細(xì)報(bào)告的整理和數(shù)據(jù)發(fā)送

8 .交付結(jié)果