定量PCR(Quantitative PCR, qPCR),也稱實時PCR(Real-time PCR)或者實時定量PCR,是指借助熒光染料或熒光標記的特異性探針,在PCR指數擴增期間實時監測PCR反應體系中的熒光信號強度的變化,從而對目的基因進行定量分析的PCR檢測技術。
術語
基線: 實時熒光定量PCR反應的基線是指在PCR開始的幾個循環中(-般為3-15個循環) 的信號水平。此階段的熒光信號變化量極小。低水平的基線信號相當于反應的背景或噪聲。每個實時熒光定量PCR反應的基線應通過用戶分析或擴增曲線自動分析,根據經驗確定。基線的設置,會影響到熒光閾值及Ct值。
熒光閾值: 熒光閾值是在熒光擴增曲線上人為設定的一個值,它可以設定在熒光信號指數擴增階段任意位置上,一般熒光閾值默認是PCR 3-15個循環熒光信號標準偏差的10倍。
Ct值: Ct值指的是PCR擴增過程中擴增產物的熒光信號達到設定的閾值時所經過的循環數。
標準曲線: 標準曲線是標準物質的物理/化學屬性跟儀器響應之間的函數關系。對已知拷貝數的標準樣品做系列稀釋,對不同稀釋度的標準樣品進行熒光定量PCR并記錄Ct值,根據Ct值及拷貝數的對數繪制得到標準曲線,標準曲線的縱坐標代表起始拷貝數的對數,橫坐標代Ct值。
服務要求
1.樣本要求
細胞:細胞數>106;
組織:總量>100 mg;
DNA或RNA樣品:總量>2 μg。
2.相關信息
靶基因信息:基因序列或GeneBank Accession Number 等。
背景資料:生物物種信息(Human、Mouse、Rat 等)、DNA/RNA 來源、基因豐度等。
qPCR引物由客戶提供或我司設計合成。
結果交付
1.RNA或DNA的濃度數據和qPCR的原始數據(熔解曲線和擴增曲線)。
2.檢測報告(包括實驗試劑、材料儀器、軟件設置參數、實驗方法、結果及分析等)。